1
00:00:00,149 --> 00:00:05,482
[Orador 1]: Un sistema más novedoso o moderno, hasta
cierto punto, ya tiene un centenario, es

2
00:00:05,482 --> 00:00:10,882
el uso de las técnicas de cultivo in vitro
para multiplicación de plantas leñosas.

3
00:00:21,023 --> 00:00:26,223
El sistema consiste o se basa en que al
separar un meristemo de la planta madre

4
00:00:26,223 --> 00:00:31,623
mientras está sobre su planta madre, la
planta le proporciona azúcares, vitaminas,

5
00:00:31,623 --> 00:00:32,556
hormonas, etc.

6
00:00:37,201 --> 00:00:41,867
Pero al separarlo de la planta madre
desaparece ese aporte y la idea es

7
00:00:41,867 --> 00:00:46,867
sustituir a esa planta que el meristemo
tiene debajo por un medio de cultivo

8
00:00:50,015 --> 00:00:55,615
naturalmente esterilizado para que no haya
infecciones para que le proporcione lo que

9
00:00:55,615 --> 00:01:00,681
la planta le proporcionaría y permita su
desarrollo La gran dificultad de los

10
00:01:00,681 --> 00:01:06,081
sistemas de cultivo in vitro es que los
sistemas tradicionales de propagación sean

11
00:01:06,081 --> 00:01:10,615
de semillas o sean métodos de
multiplicación vegetativa requieren muy

12
00:01:10,615 --> 00:01:11,415
pocos medios

13
00:01:17,099 --> 00:01:21,367
mientras que los sistemas de cultivo in
vitro no se pueden hacer chapuceando.

14
00:01:21,567 --> 00:01:26,623
Hay que disponer de unas instalaciones más
o menos sofisticadas, pero costosas,

15
00:01:26,623 --> 00:01:30,383
porque si no, no hay posibilidad ninguna
de funcionamiento.

16
00:01:30,583 --> 00:01:35,849
Entonces, las instalaciones necesarias se
pueden concretar en dos, un local y un

17
00:01:35,849 --> 00:01:36,649
invernadero.

18
00:01:37,315 --> 00:01:42,715
En el local se dispondrá de una oficina,
de una cocina, de una sala de siembra, de

19
00:01:42,715 --> 00:01:47,848
cámaras de cultivo y de uno o varios
almacenes La utilidad de cada uno de esos

20
00:01:47,848 --> 00:01:53,048
locales es, en la oficina se llevará la
administración del vivero sirve para la

21
00:01:53,048 --> 00:01:57,448
atención al cliente, en la cocina se
preparan los medios de cultivo

22
00:02:03,539 --> 00:02:08,872
y se esterilizan los medios de cultivo,
los recipientes, herramientas de trabajo.

23
00:02:09,771 --> 00:02:14,104
En la sala de siembra se procede a la
siembra y a los trasplantes.

24
00:02:14,902 --> 00:02:20,168
En las cámaras de cultivo es donde se
lleva a cabo el cultivo de los explantos y

25
00:02:20,168 --> 00:02:24,968
en el almacén sirven para guardar
material, productos químicos, etcétera.

26
00:02:25,207 --> 00:02:30,073
Todo esto es muy importante y muy
sofisticado y muy llamativo, pero es tan

27
00:02:30,073 --> 00:02:34,740
importante o más disponer de un
invernadero para la aclimatación de las

28
00:02:34,740 --> 00:02:40,140
plantas procedentes de cultivo in vitro,
donde han recibido todos y más si hubiera

29
00:02:40,140 --> 00:02:45,073
de los cuidados necesarios y no pueden
pasar de ninguna forma al aire libre

30
00:02:45,073 --> 00:02:46,207
porque se mueren.

31
00:02:47,066 --> 00:02:51,124
De modo que es muy importante la
aclimatación para asegurar la

32
00:02:51,124 --> 00:02:56,180
supervivencia de un alto porcentaje de
esas plantas que por otro lado son muy

33
00:02:56,180 --> 00:02:56,713
costosas

34
00:02:58,417 --> 00:03:03,297
Entonces se puede eso, en fin, de alguna
forma gráfica, diciendo que hace falta una

35
00:03:03,297 --> 00:03:06,750
oficina, o sea, siembra, cocina, sala de
cultivo y almacén.

36
00:03:06,770 --> 00:03:08,052
¿Qué es lo que hay en la cocina?

37
00:03:08,252 --> 00:03:11,497
Pues en la cocina hay poco más o menos lo
que hay en una cocina.

38
00:03:11,697 --> 00:03:16,697
Hay un microondas para calentar cosas, hay
una balanza, probablemente de más

39
00:03:16,697 --> 00:03:22,297
precisión que la de una cocina normal, hay
una nevera para guardar medios de cultivo,

40
00:03:22,297 --> 00:03:24,030
incluso botes con plantas,

41
00:03:25,298 --> 00:03:30,698
hay una autoclave, bueno, en las cocinas
también hay una autoclave, que es la olla

42
00:03:30,698 --> 00:03:35,898
a presión, pero esta es más grande y más
sofisticada para esterilizar medios de

43
00:03:35,898 --> 00:03:41,298
cultivo, y hay un destilador para producir
agua bidestilada, a ser posible, porque

44
00:03:41,298 --> 00:03:46,498
cualquier impureza que lleve el agua pone
en riesgo el éxito del cultivo, y eso

45
00:03:46,498 --> 00:03:48,431
sería lo que tiene la cocina.

46
00:03:53,463 --> 00:03:55,889
¿De qué se componen los medios de cultivo?

47
00:03:56,089 --> 00:04:01,022
Pues los medios de cultivo se componen de
sales minerales, de vitaminas, de

48
00:04:01,022 --> 00:04:05,622
hormonas, de azúcares y todo eso compone
el medio, digamos, nutritivo.

49
00:04:06,351 --> 00:04:11,151
Pero luego hace falta un agente
gelificante para asegurar que el explanto

50
00:04:11,151 --> 00:04:12,684
se sujeta, no se hunde.

51
00:04:18,590 --> 00:04:20,394
¿Cómo se preparan las soluciones madres?

52
00:04:20,594 --> 00:04:25,527
Las soluciones madres se preparan pesando
la cantidad correspondiente a una

53
00:04:25,527 --> 00:04:30,260
concentración, por ejemplo, 10 veces
superior a la definitiva para luego

54
00:04:30,260 --> 00:04:33,327
diluirla, que se disuelve con agua
bidestilada.

55
00:04:37,861 --> 00:04:42,994
Una vez que está eso preparado, se coloca
en un frasco, a ser posible de color

56
00:04:42,994 --> 00:04:48,327
topacio, para que no le dañen los rayos de
ultravioleta y se guarda en una cámara

57
00:04:48,327 --> 00:04:50,527
frigorífica para su conservación.

58
00:04:54,483 --> 00:04:59,196
Las sales minerales se pueden agrupar de
forma correcta en dos grupos, en

59
00:04:59,196 --> 00:05:01,292
macroelementos y microelementos.

60
00:05:01,312 --> 00:05:06,645
Y esta es la variedad de posibilidades
que, por fortuna, estos dos investigadores

61
00:05:06,645 --> 00:05:11,445
Mureshige y Skug, ya hace tiempo,
diseñaron y encontraron una fórmula que

62
00:05:11,445 --> 00:05:16,978
podríamos llamar universal, que con pocas
variaciones sirve para muchísimas plantas,

63
00:05:16,978 --> 00:05:20,978
en cuanto a contenidos de macroelementos y
de microelementos.

64
00:05:21,179 --> 00:05:25,979
Normalmente las soluciones madres se
preparan 10 veces más concentradas y

65
00:05:25,979 --> 00:05:30,845
suelen llevar nitrato amónico, cloruro
cálcico, sulfato magnésico, nitrato

66
00:05:30,845 --> 00:05:33,445
potásico, nitrato monofosfato potásico,

67
00:05:42,492 --> 00:05:47,958
y como microelemento ácido bórico, cloruro
de cobalto, sulfato de cobre, sulfato de

68
00:05:47,958 --> 00:05:53,292
hierro, sulfato de manganeso, y yoduro
potásico, la sal sódica del EDTA, molidato

69
00:05:53,292 --> 00:05:54,958
sódico y sulfato de zinc.

70
00:06:08,480 --> 00:06:13,546
Las vitaminas que se suelen utilizar no
son todas las mismas ni en las mismas

71
00:06:13,546 --> 00:06:18,213
proporciones, pueden ser ácido
aminobenzoico, ácido ascórbico, biotina,

72
00:06:18,213 --> 00:06:22,746
pantotenato cálcico, cianocobalamina,
ácido fólico, ácido nicotínico,

73
00:06:22,746 --> 00:06:27,546
riboflavina y clorhidrato de diamina, que
son lógicamente todas vitaminas

74
00:06:27,546 --> 00:06:28,480
hidrosolubles.

75
00:06:36,948 --> 00:06:42,081
En cuanto a las hormonas, se suelen
utilizar ácido anacético, ácido anastaleno

76
00:06:42,081 --> 00:06:45,481
acético, benciladenina, bencilaminopurina
y ceatina.

77
00:06:47,495 --> 00:06:52,561
De modo que eso así preparado, para
preparar un medio de cultivo, se comienza

78
00:06:52,561 --> 00:06:57,428
con un protocolo adecuado, tomando la
cantidad necesaria para completar el

79
00:06:57,428 --> 00:07:02,561
volumen que se desea de macroelementos, de
las madres de macroelementos, de la

80
00:07:02,561 --> 00:07:07,161
solución madre de microelementos,
vitaminas, hormonas y por ese orden.

81
00:07:12,051 --> 00:07:17,184
Y a continuación se completa con agua
destilada hasta el volumen que se desea.

82
00:07:18,781 --> 00:07:22,847
Y a continuación se averigua el pH de la
solución que tenemos.

83
00:07:25,307 --> 00:07:30,440
Y si no es la correcta, se corrige con
alguna gotita de ácido clorhídrico o de

84
00:07:30,440 --> 00:07:32,973
hidróxido potásico en solución normal.

85
00:07:37,177 --> 00:07:42,443
Hasta alcanzar pH del orden de 5,5 o 6,5
según la receta que se vaya a utilizar.

86
00:07:45,925 --> 00:07:48,458
A continuación se añaden los azúcares.

87
00:07:50,405 --> 00:07:51,138
se disuelve

88
00:07:53,037 --> 00:07:55,499
y nos faltaría solamente añadir el agar.

89
00:07:55,740 --> 00:08:01,340
Pero el agar, que se emplea con frecuencia
como agente gelificante, no se disuelve en

90
00:08:01,340 --> 00:08:06,873
frío y es merecer calentarlo, por lo cual
se utiliza un microondas que se programa a

91
00:08:06,873 --> 00:08:11,806
40-45 grados durante el menor tiempo
posible para que se destruyan lo menos

92
00:08:11,806 --> 00:08:14,273
posible las vitaminas y las hormonas.

93
00:08:15,959 --> 00:08:20,386
Paso ese tiempo, el líquido aparece claro
y se encapsula en los botes

94
00:08:20,386 --> 00:08:23,837
correspondientes y queda preparado a su
uso nutritivo.

95
00:08:24,037 --> 00:08:28,063
Si se va a tardar en utilizarlo, se puede
meter en frigorífico.

96
00:08:28,083 --> 00:08:32,109
La esterilización de los medios de cultivo
se hace en autoclave.

97
00:08:32,309 --> 00:08:37,575
Los medios de cultivo y las herramientas
envueltas en papel de aluminio, en este

98
00:08:37,575 --> 00:08:42,909
caso, se introducen en autoclave lo mismo
que frasco con agua destilada que sirve

99
00:08:42,909 --> 00:08:46,442
para lavar después de, por ejemplo, la
esterilización.

100
00:08:48,421 --> 00:08:49,562
o la desinfección.

101
00:08:49,582 --> 00:08:54,524
Se cierra la autoclave, se programa a 115
o 125 grados que corresponden a 1,1

102
00:08:54,524 --> 00:08:59,532
atmósfera durante 10-15 segundos y lo
importante es que siempre sea igual para

103
00:08:59,532 --> 00:09:04,149
que no cambien las condiciones
concretamente de degradación de vitaminas

104
00:09:04,149 --> 00:09:05,060
y de hormonas.

105
00:09:05,260 --> 00:09:10,460
Pasar ese tiempo y cuando se ha alcanzado
una atmósfera de temperatura se puede

106
00:09:10,460 --> 00:09:14,126
abrir, sacar lo que hemos metido y
quedaría esterilizado

107
00:09:17,530 --> 00:09:20,996
lo que son medios, herramientas y frascos
por dentro.

108
00:09:21,955 --> 00:09:25,221
En el momento de abrirlas se contaminan
por fuera.

109
00:09:25,439 --> 00:09:30,165
En cuanto al material vegetal no se puede
esterilizar porque se cocería,

110
00:09:30,165 --> 00:09:35,090
lógicamente, y la única solución es
desinfectarlo utilizando hipoclorito de

111
00:09:35,090 --> 00:09:40,282
calcio o hipoclorito sódico, mejor de
calcio, durante 10 minutos o un cuarto de

112
00:09:40,282 --> 00:09:44,875
hora agitándolo y a continuación darle
tres lavados sucesivos con agua

113
00:09:44,875 --> 00:09:46,539
bidestilada esterilizada.

114
00:09:49,492 --> 00:09:54,092
con lo cual eliminamos los restos de
hipoclorito y tenemos el material

115
00:09:54,092 --> 00:09:55,825
dispuesto para la siembra.

116
00:09:58,824 --> 00:10:03,683
La sala de siembra es una habitación
cerrada, sin ventanas, para que haya menos

117
00:10:03,683 --> 00:10:08,480
posibilidad de contaminación, y en las
cuales hay colocadas una o dos, en fin,

118
00:10:08,480 --> 00:10:13,713
las que sean necesarias, mesas de cultivo,
que es donde se llevan a cámara a cabo las

119
00:10:13,713 --> 00:10:16,206
transferencias a los frascos de cultivo.

120
00:10:16,366 --> 00:10:19,009
Eso se llaman cámaras de siembra de flujo
laminal,

121
00:10:18,989 --> 00:10:23,655
Tienen instalado uno o varios tubos
fluorescentes de rayos ultravioleta

122
00:10:23,655 --> 00:10:29,189
germicidas para, encendiéndolos con tiempo
suficiente, esterilizar las superficies a

123
00:10:29,189 --> 00:10:34,255
las que toca y tiempo antes de abrir la
puerta, se apagan, lógicamente pueden

124
00:10:34,255 --> 00:10:35,522
producir quemaduras

125
00:10:39,290 --> 00:10:44,423
Y una de las madres del cordero es la
utilización de cámaras de flujo laminar,

126
00:10:44,423 --> 00:10:49,423
que consisten en unas mesas amplias que
permiten trabajar con comodidad, que

127
00:10:49,423 --> 00:10:53,490
tienen en la parte posterior un
turboventilador que manda aire

128
00:10:55,237 --> 00:11:00,703
a través de un filtro microbiano y pasan
por fin por una rejilla donde sale el aire

129
00:11:00,703 --> 00:11:05,770
en flujo laminar muy despacio y echando
hacia afuera las posibles esporas que

130
00:11:05,770 --> 00:11:07,570
pudieran caer del exterior.

131
00:11:12,449 --> 00:11:16,656
También disponen las mesas de flujo
laminar de unas tubos fluorescentes

132
00:11:16,656 --> 00:11:20,444
germicidas para, antes de ponerse a
trabajar, ponerlo en marcha.

133
00:11:20,464 --> 00:11:25,130
Y dentro de la cámara hay siempre un
mechero encendido para flamear los

134
00:11:25,130 --> 00:11:30,064
instrumentos que han de tocar los
esplantos en las operaciones de siembra y

135
00:11:30,064 --> 00:11:31,197
de transferencia.

136
00:11:36,327 --> 00:11:41,327
Las salas de cultivo son unas habitaciones
tan grandes como sean necesarias,

137
00:11:41,327 --> 00:11:46,327
provistas de estanterías que están
climatizadas, frío y calor, para mantener

138
00:11:46,327 --> 00:11:50,593
temperaturas óptimas y que tienen baterías
de tubos fluorescentes

139
00:11:53,270 --> 00:11:58,270
de una calidad de luz que se llama
Corollux, que es la más parecida a la luz

140
00:11:58,270 --> 00:12:03,403
del sol, bajo los cuales se colocan los
frascos de cultivo para su desarrollo.

141
00:12:04,045 --> 00:12:09,111
Ahí se mantiene una intensidad de luz
adecuada y un fotoperiodo que puede ser

142
00:12:09,111 --> 00:12:14,111
normalmente de 16 horas de luz y 8 de
oscuridad, y así las plantas normales,

143
00:12:14,111 --> 00:12:18,311
salvo excepciones, funcionan mejor que con
iluminación continua.

144
00:12:20,607 --> 00:12:26,007
Luego en las salas de cultivo es donde se
produce el desarrollo de los explantos y

145
00:12:26,007 --> 00:12:30,473
una vez que está conseguida la planta
completa hay que proceder a su

146
00:12:30,473 --> 00:12:35,873
aclimatación, porque si directamente de
ahí lambeamos al campo, pues obviamente se

147
00:12:35,873 --> 00:12:38,007
mueren, si no todas, pues todas.

148
00:12:43,273 --> 00:12:48,406
De manera que hay que proceder a su
aclimatación pasándolas previamente por un

149
00:12:48,406 --> 00:12:49,139
invernadero

150
00:12:51,640 --> 00:12:56,840
en donde están plantadas en bandejas, se
aclimatan sometiéndolas a ambientes al

151
00:12:56,840 --> 00:13:01,373
principio bastante oscuros, con
temperaturas bastante altas y humedad

152
00:13:01,373 --> 00:13:06,440
relativa muy alta, para ir pasando
gradualmente a condiciones de temperaturas

153
00:13:06,440 --> 00:13:08,973
más bajas y humedad relativa más baja.

154
00:13:11,844 --> 00:13:16,777
Una vez que han pasado por esa fase,
pueden pasar con suficiente garantía a

155
00:13:16,777 --> 00:13:19,444
campo abierto para su crianza posterior.

156
00:13:21,931 --> 00:13:26,731
Un ejemplo de planta leñosa son los
híbridos de melocotón-almendro que se

157
00:13:26,731 --> 00:13:31,931
cultivan in vitro para obtener patrones
para ser utilizados luego en el cultivo

158
00:13:31,931 --> 00:13:37,197
del almendro y del melocotón Entonces el
protocolo es utilizando meristemos como

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00:13:37,197 --> 00:13:42,531
primer explanto conseguir en la fase de
implantación que de un brote sin raíces a

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00:13:42,531 --> 00:13:45,131
continuación se transfiere a otro medio

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00:13:51,428 --> 00:13:56,561
en donde se propicia su ahijamiento,
después se pasa a otro medio que promueve

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00:13:56,561 --> 00:14:01,161
su alargamiento, y por último, a
independizados, se pasa a un medio de

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00:14:01,161 --> 00:14:02,094
enraizamiento.

164
00:14:02,650 --> 00:14:07,897
Y los medios de cultivo son, curiosamente,
siempre los mismos, a diferencia de las

165
00:14:07,897 --> 00:14:08,481
hormonas.

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00:14:08,681 --> 00:14:12,188
En el primero de ahijamiento se utiliza
ácido azanero acético,

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00:14:12,168 --> 00:14:16,701
A razón de 0,01 miligramos por litro,
bencila aminopurina 0,6 y ácido

168
00:14:16,701 --> 00:14:20,901
gibralérico 0,1, en la fase de
alargamiento se esfuerza el ácido

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00:14:20,901 --> 00:14:25,301
naltaleoacético y en la fase de
enraizamiento se elimina la bencila

170
00:14:25,301 --> 00:14:28,901
aminopurina y el ácido gibralérico que son
inhibidores.