[Orador 2]: Es un honor presentar al Profesor Jean Medicina y Ciencia de la Vida. Si puedo resumir, la vida y la contribución de Jean, diría que eres una especie de símbolo de diversidad y dualidad. Primero, eres ciudadano de dos países, Bélgica y Suiza. Tienes un doctorado y un doctorado. Y has traído una contribución muy importante en el campo de bioquímica, neuroquímica y en el campo de biología celular y molecular. Así que eres una persona muy diversa. Usted es miembro de la Academia de Ciencias de Francia, miembro como participante extranjero, miembro de la Academia Europea de Ciencias, por supuesto, y miembro de la Academia Royal de Medicina de Bélgica. Usted ha recibido varios premios, por ejemplo, el Gran Prix Claude Bernard de la ciudad de París, el premio Nature Lifetime de Mentorship, y el premio Julius Axelrod en Farmacología. En el ámbito de la ciencia, lo haré muy corto porque lo presentaré, pero hoy tienes la honra porque pionieras una nueva disciplina en la biología que se llama genómica de células unidas. Tu trabajo experimental seminal fue la identificación de un solo neurona al profilar su expresión de genes. En 1989, su laboratorio inventó la pipeta de Pascal Klamm para aspirar el contenido interno de un solo neurona. que abrió el camino a la caracterización molecular completa de todos los receptores y proteínas de este único neurona. Así que fue por primera vez en la historia posible distinguir entre células unidas y neuronas unidas, que son caracterizadas por canales específicos, mientras que antes solo la población de neuronas estaba disponible. Así que esta amplificación por PCR transcriptor de transcripción que llamamos RT-PCR de célula se ha expandido en todo el mundo a pesar del escepticismo original. Y hoy, si haces una búsqueda por PCR de célula o genómica de célula, encuentras algo como 100.000 publicaciones. Así que gracias a esta contribución, que se publicó en muchos papeles importantes, como Ciencia, Naturaleza, Metodos de la Naturaleza, Neuron, PNAS, G-Neuroscience, G-Neurochemistry, y Psiquiatría Molecular. Estamos muy felices de tener aquí este premio Blas Pascal a Jean Rossier. ¡Felicidades! [Orador 1]: Muchas gracias. Muchas gracias, Daniel. por lo que hiciste para presentar mi CV para este muy reconocido premio, el premio Blaise Pascal en Medicina y Ciencias de la Vida. Para empezar, voy a mostrarles una foto de Blaise Pascal. Es muy conocido en Francia Como filósofo, escribió un libro llamado Pensar. Y para ayudar a su padre, Ves a la derecha lo que se llama la pascalina, el primer calculador que nunca se hizo para ayudar a su padre. Su padre estaba recogiendo deudas, estaba recogiendo impuestos, era un general de farmacia, y era muy, muy, muy rico. Pascale casi murió un día porque tenía este caro con cuatro caballos, cuatro caballos, bastante caro, incluso hoy en día. Y luego cayó casi en el suelo y se murió casi. para nosotros. Continuó trabajando hasta el año 1662, cuando murió bastante temprano. No tenía una buena constitución, era un niño pequeño y tenía muchas enfermedades infantiles. Pero a los 39 años le hizo mucho. Así que estoy muy orgulloso de tener a Pascal. Tisberas Pascal Award, medal, and I will put the medal in my home, and I got it, as Daniel told you, to be one of the pioneers of single-cell genomics. And single-cell genomics is leading to the present large el Programa Internacional sobre el Atlas de Células Humanas y en el Estado, por la NIH, el Programa Biomolecular Humanos. Estos dos programas siguen el gran proyecto Human Genome, fue realizado entre 1993 y 2003 para secuenciar los tres billones de nucleotidos que están en el genoma, en nuestro genoma, en el genoma humano. Entonces, para las personas que no saben de lo que es la biología molecular, Quiero presentar esta diapositiva sobre el tema de la genómica de células unidas. El dogma es que toda la información está en nuestra eléctrica doble, en la forma del ADN, así que tenemos dos eléctricas dobles por célula. Luego, obtendrás lo que se llama la transcripción. La transcripción es transformar el ADN en RNA mensajero y su RNA mensajero se traducirá para dar proteínas. Hoy no hablaremos de esta parte, la traducción en proteínas. Concentraremos en el ADN en una célula y en el mRNA en una célula. Como os he dicho, tenemos dos elixires dobles. por célula, y solo, ¿por qué solo? 25.000 genes, porque un único organismo, como Erythiocolli, ya tiene 2.000 genes, y cuando comparas a Erythiocolli con seres humanos, piensas que deberíamos obtener muchos más genes que eso. Y bueno, esa fue realmente la idea, antes de este gran esfuerzo de secuenciar el genoma, Y nos dijimos, bueno, somos solo 10 veces más complicados que Erichia coli. Ahora, para ir a la transcripción, si solo tienes dos dobles hélices en una célula, obtendrás millones de mRNA en una sola célula. Y casi, diría yo, 10.000 a 15.000 de los diferentes genes se expresan en una célula en un momento, Y también el número de transcripciones por célula es bastante alto. Puedes obtener, por supuesto, uno, que es el mínimo, o cero si el gen no está transcribido, pero puedes obtener hasta 100.000 copias, que es bastante mucho en una célula. Entonces, ¿qué hicimos? Hicimos este experimento. single cell RT-PCR after patch clamp. Patch clamp is to use electrodes and you see the electrode over here which is put on the surface of this neuron and then you could get the current, you inject current and you will see that that cell will discharge action potential. Así que ese es realmente el patrocinador. El patrocinador fue el producto de Sackmann y Ayer, que obtuvieron el premio Nobel en 1991 por ese tipo de trabajo. Así que lo que simplemente hacemos es que, en lugar de usar sólo el electrodo para registrar la actividad eléctrica de la célula, usamos el electrodo para aspirar el interior de la célula, transformar el mRNA con transcriptores reversos, así como el cDNA, y luego hacer una amplificación de PCR multiplex. y se puede ver que el material que obtenemos de esa sola célula contiene GAD, que es la enzima que hace GABA, que hace el neurotransmitidor inhibitor y algunas otras proteínas que no voy a describir aquí. En el pipet, también se pone biocitinina, que es un marcador fluorescente, como puedes ver, y luego puedes labelar la célula completa y obtienes la anatomía. Así que al mismo tiempo obtienes la anatomía, la fisiología de la célula, y también qué tipo de mRNA la célula está haciendo. Y así fue realmente lo que hicimos. ¿Por qué lo hicimos? Porque somos neurofarmacólogos, ¿sabes? Y... Queremos caracterizar la respuesta eléctrica de la célula cuando aplicamos un neurotransmitidor, el glutamato. El glutamato es el neurotransmitidor excitatorio y miramos la presencia de algunas de las subunidades. ¿Por qué lo hicimos en ese momento? Porque el número de subunidades respondiendo al glutamato fueron muy numerosas. Fue realmente una embarazada de los genes responsables de hacer el receptor para el glutamato. Así que deseábamos ver en una sola célula qué tipo de mRNA teníamos ahí. Empezamos, por supuesto, con una célula más grande, la célula Purkinje, y usamos eso para caracterizar de esa célula única el tipo de subunidades que forman un canal, el canal receptor. Lo hicimos en 1992, y seguimos haciendo eso. Teníamos estos dos papeles, que se publicaron en 1992 y 1994. Y luego, Bueno, tuvimos que publicar. Y puedo decir que fue difícil, porque la gente no creía que era posible. It was really a blockade between the molecular biologist and the anatomist and the physiologist. You need thousands of cells to do single cell, to do RT-PCR. And we proved it's not the case. So we sent the manuscript, and it came back many times. And eventually, one of the referees wrote that... escribió que los autores han realizado todos los controles pedidos, acepto su artículo, aunque todavía estoy convencido de que realizar PCR en una sola célula es imposible, y imposible está en capital en su letra. Así que hoy, en octubre del 29, Keywords single cell genomic and single cell PCR retrieved 100,000 and 25,000 publications respectively on PubMed. I may say it's a good score for an impossible task. So, then we became interested in characterizing all the different types of neurons we were working on. Y en ese artículo analizamos los interneurones del córtex, algunos de los interneurones del córtex. Y en ese tiempo, también en 1997, los referidos fueron un poco difíciles, puedo decir. Y uno de los referidos no vio el interés de este tipo de ejercicio botánico. Bueno, fue como Linné, como otras personas, caracterizando a Aristóteles, tal vez volviendo a Aristóteles, haciendo una línea para ver qué número de especies teníamos en la Tierra. Y este tipo de botánico ahora realmente está en todo el mundo, y lo verás por la célula humana Atlas y otros, la gente realmente quiere hacer eso en toda la célula de un ser humano. Entonces, continuamos trabajando y introducimos el uso de clustering insupervisto. Y ese tipo de análisis es realmente el estándar, el estándar canónico para los estudios genómicos de células unidas en el momento presente. So, one of the study that we did is over here. We look at the interneurons in the cortex, and we look at only 200 neurons. And with that, you can see that we get five types of interneurons according to the expression of their mRNA for y, por ejemplo, tenemos el VIH, un peptídeo muy importante, no, un peptídeo vasointestinal, somatostatina y parvalbumina. Ese es el tipo de neuronas que la gente ha analizado desde hace mucho tiempo. Pero vino en 2009 Arim Azim Surani, del Instituto Gordon de la Universidad de Cambridge, inventó una técnica para hacer la secuencia de mRNA en la análisis transcriptora mundial de una sola célula. En ese tiempo, sólo usaba 5 células. y fue capaz de mostrar la distribución de los varios mRNAs que son importantes en la primera etapa de la formación de la blastomera. Y luego, todo cambió de repente porque se utilizó por otras personas para hacer este tipo de análisis botánico, mirando los diferentes tipos de neuronas. Así que vemos que tenemos millones de transcriptos en una sola célula. de 10.000 a 15.000 transcriptos de diferentes genes. El cetioplasma de una sola célula contiene hasta 100.000 copias de mRNA de una sola célula. Y la sección SCRNA identifica todos los transcriptos y determina las modificaciones. Eso es bueno, porque se puede ver el splicing y la edición de todos estos transcriptos. y te dará una análisis dinámica de la transcripción. El antiguo versus el nuevo. El nuevo no se explota, el antiguo se explota. Así que podrías hacer una dinámica, saber exactamente cuándo el mRNA está sintetizado. Y uno de los éxitos de ese enfoque, y verás que el éxito se realiza en 20.000 células en el Instituto Allen en Seattle. Y con 20.000 células, obtuvieron 125 diferentes clústeres. Así que las células expresan un conjunto de mRNA. Y les mostré recientemente que en nuestro trabajo tuvimos VIH, SST, y parvalbumina. solo había un solo clúster, y aquí se ve que con esta cantidad de células, podíamos obtener mucho más, 8 clústeres para el par de válvulas, 18 para el SST, y 14 para el VIP. Entonces, cuando se añaden más células, se obtienen más clústeres. Así que se puede ver la diferencia entre células que están cerca de las otras. Y luego, fue un artículo reciente, de escribir a cura de tabeles y revivir de trens y de single-cell transcript omic by valentin senson which is in the human cell atlas and the idea you will see it's going so fast with a You see here the number of paper with clustering of single cell over here, up to 50 per month at the present time. And before that, in 97, you had only one or two of this type of paper. Then you have the Tang and Surani paper in 2009. And now you see that we have plenty, plenty of this paper. Y usan diferentes técnicas para eso. Y la idea general de eso es que más células analizas, más clústeres encuentras. Por ejemplo, si miras a solo 10 células, no puedes obtener más que pocos clústeres, eso es seguro. Cuando vas a más de 1.000 células, ves que puedes obtener 10 clústeres o un poco más. Cuando vas a 100.000, entonces obtendrás aproximadamente 100 clústeres, y cuando llegues a un millón, obtendrás un millón de diferentes clústeres. Así que ahí es donde estamos en el momento presente. Y... La idea ha cambiado ahora con esta nueva técnica. Esta nueva técnica es ATAC, es el ácido para transposar cromáticos accesibles. Es mirar no a la mRNA, donde se ve que hay muchas copias, sino solo a la DNA de una sola célula, las dos hélices dobles. and you wish to see which are the ones in use and how are they used. And so at the present time, it's possible to go to analyze the genes which are... los genes que están leyendo para... Entonces, si miras la profilación de mRNA de una sola célula, es regulada por la maquinaria de transcripción de genes. Y eso da... El último, ese fue el libro, el primer libro sobre el ataque, y así tenemos un ataque de una sola célula, y el libro que salió la semana pasada, sobre la secuencia de transcriptores y la accesibilidad cromática en la misma célula, por Cientists at UCSD. Y hacen una profilación adecuada de cromáticos accesibles, profilación NMRNA, dentro de la misma célula, permitiendo la remuneración directa de la regulación transcripcional a su output. La genómica de una célula con el desarrollo de un ataque de una célula dash sec, hyphen sec, and single-cell RNA sec describe the complete analysis of a single cell with description of its accessible chromatin only to two molecules per cell, I say, stress, and the mRNA splice and edited profiling. All that was a pipe dream in the 90s. y se convirtió en realidad hoy en día. Así que el proyecto Human Cell Atlas no está en marcha. Las mapas de referencia comprensivas de todos los humanos, 30 trillones de células, van a ser una base para la comprensión de la salud humana y la diagnóstica, maturación y tratamiento de enfermedades. Myself, I feel very glad and honored that URASC has awarded me the Blaise Pascal Medal for my contribution to the field. And I will end this talk by some personal feelings. Sí, como testigo de 50 años, bueno, yo tengo 75 años, de investigación biológica, hice una buena elección 50 años atrás cuando empecé la carrera de científico. Podría haber sido un médico médico y mi madre sería muy contenta de mantener a algunos pacientes en y fuera. Pero no lo hice, hice ciencia, y puedo decir que la ciencia Me da alegría. Sí, la ciencia es una fuente de felicidad con las preguntas necesarias y la frustración. Sí, añadimos mucha frustración, pero también mucho placer para mantener el deseo vivo. Y es importante tener alguna frustración si no continúas. Y lo que me gusta en la ciencia es un espacio de libertad infinita. Muchas gracias. [Orador 2]: Esto fue al nivel de lo que esperaba. Quizás un poco demasiado sofisticado para algunas de las personas aquí, pero creo que obtuviste la... Gracias, muchas gracias.